Номер№82 (4) 2020

ДEЗGKGИPИBGHУKЛEAЗHA AK^BHIG^ IMУHGГЛGBУЛIHIB TA GИPGBATGK KPGBI ПPИ СПОHДИЛОAPTPОПATIЇ

Кундер O.B.

Резюме. Мета дослідження - встановити імунопатогенетичну роль, а також визначити клінічну та діагностичну значимість дезоксирибонуклеазноЇ (ДHKазноЇ) активності поліклональних імуноглобулінів (IgG) і сироваток крові при спондилоартропатіЇ. Обстежено 266 пацієнтів зі спондилоартропа-тією (9S хворих на псоріатичний артрит, 120 -на реактивний артрит і S1 - на анкілозивний спондиліт) та 69 здорових осіб. Використовували метод визначення ДHKазноЇ активності поліклональних IgG та сироваток крові, що базується на утворенні згустку ріванолу з ДHKобернено пропорційно деполімеризаціЇ останньоЇ під дією ДHKазноЇ активності різного походження. Установлено, що рівень і частота виявлення ДHKазноЇ активності поліклональних IgG та сироваток крові у пацієнтів зі спондилоартропатією достовірно перевищують контрольні значення. Проаналізовано кореляційні взаємозв'язки між рівнями абзимноЇ та сироватковоЇ ДHKазноЇ активності і деякими клінічними, лабораторними показниками та лікувальними заходами, що підтверджують патогенетичну роль ДHKазноЇ активності IgG та сироваток крові при спондилоартропатіЇ.

Резюме. Цель исследования — установить иммунопатогенетическую роль, а также определить клиническую и диагностическую значимость дезоксирибонуклеазной (ДНКазной) активности поликлональных иммуноглобулинов (!дй) и сывороток крови при спондилоартропатии.

Обследовано 266пациентов со спондилоартропатией(95 — псориа-тическим артритом, 120 — реактивным артритом и 51 — анкилозирую-щим спондилитом) и 69 здоровых лиц. Использовали метод определения ДНКазной активности поликлональных !дй и сывороток крови, основанный на образовании сгустка риванола с ДНК обратно пропорционально деполимеризации последней под действием ДНКазной активности различного происхождения.

Установлено, что уровень и частота выявляемостиДНКазной активности поликлональных !дй и сывороток крови у пациентов со спондилоартропатией достоверно превышают контрольные значения. Проанализированы корреляционные взаимоотношения между уровнями абзимной и сывороточной ДНКазной активности и некоторыми клиническими, лабораторными показателями и лечебными мероприятиями, подтверждающие патогенетическую роль ДНКазной активности !дй и сывороток крови при спондилоартропатии.

У больных псориатическим артритом выявлены наибольшие уровни ДНКазной активности поликлональных !дй и сывороток крови по сравнению с реактивным артритом и анкилозирующим спондилитом. Разработаны тесты дифференциальной диагностики спондилоартропа-тий на основе определения ДНКазной активности !дй и сывороток крови. Установлено, что определение удельной ДНКазной активности !дй соответствует критериям полезных диагностических тестов, а сывороточной ДНКазной активности — критериям наиболее полезных диагностических тестов.

Спондилоартропатии (СпА) — значимая медико-социальная проблема, связанная с существенным влиянием не только на экономическое состояние общества в целом, но и на качество жизни каждого отдельного индивидуума [6, 8]. На сегодняшний день СпА продолжают оставаться недостаточно изученной патологией. Окончательно не ясна этиология, много спорных вопросов связано с иммунопатогене-тическими механизмами данных заболеваний. Активно обсуждаются патоморфологические изменения при СпА, дискутируются вопросы инициации и прогрессирования спондилита, сакро-илеита, энтезопатий.

Значительные сложности представляет и дифференциальная диагностика отдельных СпА. В частности, такие ситуации, как типичное для анкилозирующего спондилита (АС) поражение позвоночника при наличии кожного псориаза, эрозивный периферический артрит и рецидивирующие синовиты при клинической картине АС, сакроилеит и спондилит IV рентгенологической стадии без признаков поражения периферических суставов при наличии кожного псориаза, се-ропозитивные по ревматоидному фактору СпА, изолированный сакроилеит и т.д.

Особенно перспективными следует признать новые, не имеющие аналогов направления изучения СпА, которые могут расширить существующие представления об иммунопатогенезе данных заболеваний, а также использоваться для их диагностики. На роль подобного современного направления в изучении СпА может претендовать абзимология (наука об антителах и иммуноглобулинах, обладающих каталитической активностью), развитие которой в последние годы открывает значительные возможности для исследования иммунологических изменений при различных заболеваниях. Каталитические антитела уже определяются как «новый молекулярный инструмент» [3, 7] для изучения ревматических и кардиологических заболеваний, болезней эндокринной системы.

Aбзимнaя активность изучается при системных заболеваниях соединительной ткани, ревматоидном артрите (PA), а также при патологии щитовидной железы, желудочно-кишечного тракта, инфекционных болезнях и др. [1, 2]. Полученные предварительные результаты в этом направлении дают основания для дальнейших исследований, в том числе и с целью разработки новых методов диагностики и дифференциальной диагностики

Принимая во внимание наличие взаимосвязи между каталитической активностью иммуноглобулинов и сывороток крови, а также, учитывая трудоемкость определения различных видов аб-зимной активности, представляют значительный интерес исследования, посвященные изучению сывороточной каталитической активности и возможности использования результатов ее определения с диагностической целью.

В исследованиях последнего десятилетия установлено повышение сывороточной ДНКаз-ной активности при остром инфаркте миокарда [12], а определение активности этого сывороточного фермента уже предлагается в качестве нового эффективного маркера для ранней диагностики инфаркта миокарда. Выявлены изменения ДНКазной и гиалуронидазной сывороточной активности при ревматических заболеваниях (PA и системной красной волчанке) [1З].

Однако до настоящего времени не изучены патогенетическое значение и диагностические возможности изменения сывороточной каталитической активности при

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обследовано 2ВВ пациентов со (95 больных псориатическим артритом ^A), 120 — реактивным артритом и 51 — анкилозирующим спондилитом (AC)). Контрольную группу составили 69 практически здоровых лиц – доноров Витебской областной станции переливания крови.

Исследование выполняли в соответствии с этическими принципами проведения биомедицинских исследований с участием людей, изложенными в Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации. Пациенты дали письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Принадлежность заболеваний к устанавливали в соответствии с критериями ESSG (European Spondyloarthropathy Study Group) [11]. Диагноз ПA устанавливали согласно критериям CASPAR 2006 г. [15]. Диагноз PеA устанавливали с использованием предварительных Международных критериев (4 International Workshop on Reactive Arthritis, Berlin, 1999) [9]. Диагноз AC устанавливали в соответствии с модифицированными Нью-Йоркскими критериями 19В4 г. [1В].

Характеристика пациентов со и здоровых лиц по полу и возрасту представлена в табл. 1.

Таблица 1

Характеристика пациентов со СпА и здоровых лиц по полу и возрасту

Показатель СпА ПА РеА АС Здоровые лица
Количество, лет
Мужчины 168(63) 44 (46) 73 (60,8) 51(100) 44 (64)
Женщины 98 (37) 51 (54) 47 (39,2) 25 (36)
Возраст, лет
Средний 40,37±8,85 (95% ДИ: 39,29-41,43) 42,82±8,18 (95% ДИ: 41,16-44,49) 37,82±9,04 (95% ДИ: 36,18-39,45) 42,0±9,01 (95% ДИ: 39,5244,48) 41,1±10,94 (95% ДИ: 38,4543,67)
Мужчины 39,56±8,97 (95% ДИ: 38,19-40,93) 41,57±8,80 (95% ДИ: 38,8944,24) 36,97±9,04 (95% ДИ: 34,8639,08) 42,0±9,01 (95% ДИ: 39,5244,48) 42,20±8,63 (95% ДИ: 39,5844,83)
Женщины 41,74±8,50 (95% ДИ: 40,04 43,44) 43,90±7,51 (95% ДИ: 41,78-

46,0ї)

38,81±9,18 (95% ДИ: 36,11-41,5) 40,64±7,67 (95% ДИ: 37,47-43,81)

Характеристика пациентов с ПА представлена в табл. 2.

Таблица 2

Характеристика пациентов с ПА

Показатель Все пациенты с ПА,n (%)
Количество пациентов 95 (100)
Отягощенная наследственность по псориазу 20 (21)
Распространенный псориаз 55 (58)
Ограниченный псориаз 40 (42)
Обыкновенный (вульгарный) псориаз 69 (73)
Обыкновенный и интертригинозный псориаз 14 (15)
Эритродермический псориаз 9 (9)
Экссудативный псориаз 3 (3)
Стационарная стадия 73 (77)
Регрессирующая стадия 8 (8)
Стационарно-регрессирующая стадия 14 (15)
Непрерывно рецидивирующее течение 59 (62)
Торпидное течение 12 (13)
Поражение ногтей 86 (90)
Полиартрит 84 (88)
Олигоартрит 11 (12)
Дактилит 27 (28)
Сакроилеит 37 (39)
Спондилит 46 (48)
Внутрисуставной остеолиз 11 (11,5)
Акральный остеолиз 2 (2)
Активность 1 степени 36 (38)
Активность II степени 38 (40)
Активность III степени 21 (22)
Рентгенологическая II стадия 59 (62)
Рентгенологическая III стадия 25 (26)
Рентгенологическая IV стадия 11 (12)
Функциональная недостаточность I степени 65 (69)
Функциональная недостаточность II степени 25 (26)
Функциональная недостаточность III степени 5 (5)
Терапия НПВП 95 (100)
Базисная терапия метотрексатом (7,5-15 мг/нед еженедельно) 42 (44)

В табл. 3 и 4: НПВП – нестероидные противовоспалительные препараты.

Характеристика пациентов с РеА представлена в табл. 3.

Таблица 3

Характеристика пациентов с РеА

Показатель Все пациенты с РеА,n (%)
Количество пациентов 120 (100)
Полиартрит 34 (28)
Олигоартрит 45 (37,5)
Сакроилеит 39 (32,5)
Спондилит 22 (18,3)
Ахиллобурсит 73 (60,8)
Энтезопатии 86 (71,6)
Активность I степени 49 (40,8)
Активность II степени 32 (26,6)
Активность III степени 39 (32,6)
Рентгенологическая I стадия 50 (41,6)
Рентгенологическая II стадия 66 (55,9)
Рентгенологическая III стадия 3 (2,5)
Функциональная недостаточность I степени 117 (97,5)
Функциональная недостаточность II степени 3 (2,5)
Конъюнктивит 11 (9)
Увеит 2(1,7)
Иридоциклит 3 (2,5)
Лихорадка 10 (8,3)
Изолированная хламидийная урогенитальная инфекция 98 (82)
Хламидийная инфекция и трихомониаз 12 (10)
Хламидийная, уреаплазменная инфекция и трихомониаз 10 (8)
Терапия НПВП 120 (100)

Характеристика пациентов с АС представлена в табл.4.

Таблица 4

Характеристика пациентов с АС

Показатель Все пациенты с АС, n (%)
Количество пациентов 51 (100)
Центральная форма 36 (71)
Ризомелическая форма 7 (14)
Периферическая форма 8 (15)
СакроилеитI стадия 4 (7,8)
Сакроилеит II стадия 12 (23,5)
Сакроилеит III стадия 14 (27,5)
Сакроилеит IV стадия 18 (35,3)
Спондилит I стадия 4 (7,8)
Спондилит II стадия 10 (19,6)
Спондилит III стадия 19 (37,3)
Спондилит IV стадия 18 (35,3)
Энтезопатии 43 (84)
Активность I степени 10 (19,6)
Активность II степени 24 (47)
Активность III степени 17 (33,4)
Рентгенологическая I стадия 4 (7,8)
Рентгенологическая II стадия 10 (19,6)
Рентгенологическая III стадия 19 (37,3)
Рентгенологическая IV стадия 18 (35,3)
Функциональная недостаточность I степени 14 (27,5)
Функциональная недостаточность II степени 34 (66,7)
Функциональная недостаточность III степени 3 (5,8)
Терапия НПВП 51 (100)
Базисная терапия сульфасалазином (2,0 г/сут ежедневно) 15 (29)

В качестве материала для исследований использовали сыворотки крови и поликлональные IgG, выделенные из сыворотки крови пациентов со и здоровых лиц. Выделение препаратов по-ликлональных IgG 1; 2 и 4 подкласса из сыворотки крови проводили комбинированным риванол-аффиннохроматографическим методом [1, 2]. Контроль чистоты полученных IgG проводили с помощью электрофореза в полиакриаламидном геле в диссоциирующих и восстанавливающих условиях [5].

Постановка реакций ДНКазной активности осуществлялась согласно методикам, разработанным нами и апробированным на различных биологических моделях [З, 4]. Оценивалась ДНКазная активность IgG на 1 мг образца (удельная ДНКазная активность IgG). Учет реакции проводили визуально в баллах. Отсутствие активности – компактный сгусток ДНК – 0 баллов; 1 балл – минимальная активность – рыхлый сгусток; 2 балла – слабая активность – рыхлый сгусток, хлопья, нити; З – умеренная активность – хлопья, нити; 4 – высокая активность — распад сгустка, хлопья, нити; 5 баллов — максимальная активность — полный распад сгустка ДНК с образованием гомогенной взвеси. Статистический анализ результатов исследования выполняли с использованием аналитического пакета Statistica 7.0. Для оценки диагностической точности разработанных лабораторных тестов проводили расчет операционных характеристик [4].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Уровни удельной ДНКазной активности Ідй у обследованных лиц представлены в табл. 5.

Таблица 5

Уровни удельной ДНКазной активности ідв у обследованных лиц

Группа Уровни удельной ДНКазной активности IgG
Медиана Размах (min-max) 95% ДИ для медианы 25-75-я перцен-тиль Наблюдений, n
СпА 2,50 0,00-5,00 2,50-3,00 1,5-3,50 266
ПА 3,50 1,00-5,00 3,29-3,71 3,00-4,00 95
РеА 2,50 0,00-5,00 2,00-2,56 1,50-3,00 120
АС 1,50 0,00-4,00 1,0-1,50 1,00-2,00 51
Здоровые лица 0,00 0,00-2,50 0,00-0,50 0,00-0,50 69

Различия между уровнями удельной ДНКазной активности IgG у пациентов со СпА, а также у пациентов с РеА, ПА и АС по сравнению с контрольными величинами в группе здоровых лиц оказались статистически высокозначимыми (p<0,0001). Выявлены статистически высокозначимые различия между уровнями удельной ДНКазной активности IgG у пациентов с ПА и РеА, ПА и АС, а также РеА и АС (p<0,0001).

Частота выявляемости положительных результатов при определении удельной ДНКазной активности Ідй (31 балла) у обследованных лиц представлена в табл. 6.

Таблица 6

Частота выявляемости положительных результатов определения удельной ДНКазной активности ДО у обследованных лиц

Группа Частота резул Д выявляемости положительных ьтатов определения удельной НКазной активности IgG
% 95% ДИ Наблюдений, n
СпА 93,61 90,67-96,55 266
ПА 100,00 100,00-100,00 95
РеА 95,00 91,10-98,90 120
АС 78,43 67,14-89,72 51
Здоровые лица 23,19 13,23-33,15 69

Определены статистически высокозначимые различия между частотами выявляемости положительных результатов определения удельной ДНКазной активности IgG у пациентов со СпА и у здоровых лиц, а также у пациентов с ПА, РеА и АС и в контрольной группе (p

При выполнении ЯОО-анализа теста дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности Ідй установлено, что максимальные показатели чувствительности и специфичности наблюдаются при уровне удельной ДНКазной активности (cut-off), равном 2,5 балла.

ROC-кривая для теста дифференциальной диагностики ПA и по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности IgG представлена на рис. 1.

Показатели ЯОО-анализа теста дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности !дй представлены в табл. 7.

Таблица 7

Показатели ROC-анализа для теста дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности IgG

Показатель РОС-анализа Значение
Площадь под ROC-кривой (AUC) 0,82
Стандартная ошибка 0,09
95% ДИ 0,77-0,83
Уровень значимости (р) 0,0001

Результаты расчета основных показателей теста для дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности Ідй представлены в табл. 8.

Таблица 8

Результаты расчета основных показателей теста для дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определе-

ния уровней удельной ДНКазной активности IgG

Характеристики теста ПА и СпА (АС+РеА)
Диагностическая чувствительность 78,95%(95% ДИ: 69,40-86,60)
Диагностическая специфичность 69,59% (95% ДИ: 62,10-76,40)
Прогностическая ценность положительная (прогностическая ценность положительного результата теста), % 59,10
Прогностическая ценность отрицательная (прогностическая ценность отрицательного результата теста), % 85,60
Индекс точности (диагностическая эффективность), % 67,67
Отношение правдоподобия положительного результата теста (ОП+) 2,60
Отношение правдоподобия отрицательного результата теста (ОП-) 0,30

При изучении взаимосвязи между уровнями удельной ДНКазной активности Ідй и клиническими, лабораторными и инструментальными данными, лечебными мероприятиями у обследованных лиц получены результаты, представленные в табл. 9 (указаны коэффициенты корреляции при уровне значимости р

Таблица 9

Результаты анализа взаимосвязи между уровнями удельной ДНКазной активности IgG и клиническими, лабораторными и инструментальными данными, лечебными мероприятиями

Коррелирующие признаки Коэффициент корреляции, r
СпА
Уровень удельной ДНКазной активности IgG и пролиферативные явления в суставах 0,35
Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие скованности в суставах кистей 0,36
Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие кожного псориаза 0,50
Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие артрита 0,48
Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие полиартрита 0,38
ПА
Уровень удельной ДНКазной активности IgG и экссудативные явления в суставах 0,35
No Comments » Додати свій
Leave a comment