ДEЗGKGИPИBGHУKЛEAЗHA AK^BHIG^ IMУHGГЛGBУЛIHIB TA GИPGBATGK KPGBI ПPИ СПОHДИЛОAPTPОПATIЇ
Резюме. Мета дослідження - встановити імунопатогенетичну роль, а також визначити клінічну та діагностичну значимість дезоксирибонуклеазноЇ (ДHKазноЇ) активності поліклональних імуноглобулінів (IgG) і сироваток крові при спондилоартропатіЇ. Обстежено 266 пацієнтів зі спондилоартропа-тією (9S хворих на псоріатичний артрит, 120 -на реактивний артрит і S1 - на анкілозивний спондиліт) та 69 здорових осіб. Використовували метод визначення ДHKазноЇ активності поліклональних IgG та сироваток крові, що базується на утворенні згустку ріванолу з ДHKобернено пропорційно деполімеризаціЇ останньоЇ під дією ДHKазноЇ активності різного походження. Установлено, що рівень і частота виявлення ДHKазноЇ активності поліклональних IgG та сироваток крові у пацієнтів зі спондилоартропатією достовірно перевищують контрольні значення. Проаналізовано кореляційні взаємозв'язки між рівнями абзимноЇ та сироватковоЇ ДHKазноЇ активності і деякими клінічними, лабораторними показниками та лікувальними заходами, що підтверджують патогенетичну роль ДHKазноЇ активності IgG та сироваток крові при спондилоартропатіЇ.
Обследовано 266пациентов со спондилоартропатией(95 — псориа-тическим артритом, 120 — реактивным артритом и 51 — анкилозирую-щим спондилитом) и 69 здоровых лиц. Использовали метод определения ДНКазной активности поликлональных !дй и сывороток крови, основанный на образовании сгустка риванола с ДНК обратно пропорционально деполимеризации последней под действием ДНКазной активности различного происхождения.
Установлено, что уровень и частота выявляемостиДНКазной активности поликлональных !дй и сывороток крови у пациентов со спондилоартропатией достоверно превышают контрольные значения. Проанализированы корреляционные взаимоотношения между уровнями абзимной и сывороточной ДНКазной активности и некоторыми клиническими, лабораторными показателями и лечебными мероприятиями, подтверждающие патогенетическую роль ДНКазной активности !дй и сывороток крови при спондилоартропатии.
У больных псориатическим артритом выявлены наибольшие уровни ДНКазной активности поликлональных !дй и сывороток крови по сравнению с реактивным артритом и анкилозирующим спондилитом. Разработаны тесты дифференциальной диагностики спондилоартропа-тий на основе определения ДНКазной активности !дй и сывороток крови. Установлено, что определение удельной ДНКазной активности !дй соответствует критериям полезных диагностических тестов, а сывороточной ДНКазной активности — критериям наиболее полезных диагностических тестов.
Спондилоартропатии (СпА) — значимая медико-социальная проблема, связанная с существенным влиянием не только на экономическое состояние общества в целом, но и на качество жизни каждого отдельного индивидуума [6, 8]. На сегодняшний день СпА продолжают оставаться недостаточно изученной патологией. Окончательно не ясна этиология, много спорных вопросов связано с иммунопатогене-тическими механизмами данных заболеваний. Активно обсуждаются патоморфологические изменения при СпА, дискутируются вопросы инициации и прогрессирования спондилита, сакро-илеита, энтезопатий.
Значительные сложности представляет и дифференциальная диагностика отдельных СпА. В частности, такие ситуации, как типичное для анкилозирующего спондилита (АС) поражение позвоночника при наличии кожного псориаза, эрозивный периферический артрит и рецидивирующие синовиты при клинической картине АС, сакроилеит и спондилит IV рентгенологической стадии без признаков поражения периферических суставов при наличии кожного псориаза, се-ропозитивные по ревматоидному фактору СпА, изолированный сакроилеит и т.д.
Особенно перспективными следует признать новые, не имеющие аналогов направления изучения СпА, которые могут расширить существующие представления об иммунопатогенезе данных заболеваний, а также использоваться для их диагностики. На роль подобного современного направления в изучении СпА может претендовать абзимология (наука об антителах и иммуноглобулинах, обладающих каталитической активностью), развитие которой в последние годы открывает значительные возможности для исследования иммунологических изменений при различных заболеваниях. Каталитические антитела уже определяются как «новый молекулярный инструмент» [3, 7] для изучения ревматических и кардиологических заболеваний, болезней эндокринной системы.
Aбзимнaя активность изучается при системных заболеваниях соединительной ткани, ревматоидном артрите (PA), а также при патологии щитовидной железы, желудочно-кишечного тракта, инфекционных болезнях и др. [1, 2]. Полученные предварительные результаты в этом направлении дают основания для дальнейших исследований, в том числе и с целью разработки новых методов диагностики и дифференциальной диагностики
Принимая во внимание наличие взаимосвязи между каталитической активностью иммуноглобулинов и сывороток крови, а также, учитывая трудоемкость определения различных видов аб-зимной активности, представляют значительный интерес исследования, посвященные изучению сывороточной каталитической активности и возможности использования результатов ее определения с диагностической целью.
В исследованиях последнего десятилетия установлено повышение сывороточной ДНКаз-ной активности при остром инфаркте миокарда [12], а определение активности этого сывороточного фермента уже предлагается в качестве нового эффективного маркера для ранней диагностики инфаркта миокарда. Выявлены изменения ДНКазной и гиалуронидазной сывороточной активности при ревматических заболеваниях (PA и системной красной волчанке) [1З].
Однако до настоящего времени не изучены патогенетическое значение и диагностические возможности изменения сывороточной каталитической активности при
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Обследовано 2ВВ пациентов со (95 больных псориатическим артритом ^A), 120 — реактивным артритом и 51 — анкилозирующим спондилитом (AC)). Контрольную группу составили 69 практически здоровых лиц – доноров Витебской областной станции переливания крови.
Исследование выполняли в соответствии с этическими принципами проведения биомедицинских исследований с участием людей, изложенными в Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации. Пациенты дали письменное информированное согласие на участие в исследовании.
Принадлежность заболеваний к устанавливали в соответствии с критериями ESSG (European Spondyloarthropathy Study Group) [11]. Диагноз ПA устанавливали согласно критериям CASPAR 2006 г. [15]. Диагноз PеA устанавливали с использованием предварительных Международных критериев (4 International Workshop on Reactive Arthritis, Berlin, 1999) [9]. Диагноз AC устанавливали в соответствии с модифицированными Нью-Йоркскими критериями 19В4 г. [1В].
Характеристика пациентов со и здоровых лиц по полу и возрасту представлена в табл. 1.
Таблица 1
Характеристика пациентов со СпА и здоровых лиц по полу и возрасту
| Показатель | СпА | ПА | РеА | АС | Здоровые лица |
| |
|||||
| Мужчины | 168(63) | 44 (46) | 73 (60,8) | 51(100) | 44 (64) |
| Женщины | 98 (37) | 51 (54) | 47 (39,2) | – | 25 (36) |
| |
|||||
| Средний | 40,37±8,85 (95% ДИ: 39,29-41,43) | 42,82±8,18 (95% ДИ: 41,16-44,49) | 37,82±9,04 (95% ДИ: 36,18-39,45) | 42,0±9,01 (95% ДИ: 39,5244,48) | 41,1±10,94 (95% ДИ: 38,4543,67) |
| Мужчины | 39,56±8,97 (95% ДИ: 38,19-40,93) | 41,57±8,80 (95% ДИ: 38,8944,24) | 36,97±9,04 (95% ДИ: 34,8639,08) | 42,0±9,01 (95% ДИ: 39,5244,48) | 42,20±8,63 (95% ДИ: 39,5844,83) |
| Женщины | 41,74±8,50 (95% ДИ: 40,04 43,44) | 43,90±7,51 (95% ДИ: 41,78-
46,0ї) |
38,81±9,18 (95% ДИ: 36,11-41,5) | – | 40,64±7,67 (95% ДИ: 37,47-43,81) |
Характеристика пациентов с ПА представлена в табл. 2.
Таблица 2
Характеристика пациентов с ПА
| Показатель | Все пациенты с ПА,n (%) |
| Количество пациентов | 95 (100) |
| Отягощенная наследственность по псориазу | 20 (21) |
| Распространенный псориаз | 55 (58) |
| Ограниченный псориаз | 40 (42) |
| Обыкновенный (вульгарный) псориаз | 69 (73) |
| Обыкновенный и интертригинозный псориаз | 14 (15) |
| Эритродермический псориаз | 9 (9) |
| Экссудативный псориаз | 3 (3) |
| Стационарная стадия | 73 (77) |
| Регрессирующая стадия | 8 (8) |
| Стационарно-регрессирующая стадия | 14 (15) |
| Непрерывно рецидивирующее течение | 59 (62) |
| Торпидное течение | 12 (13) |
| Поражение ногтей | 86 (90) |
| Полиартрит | 84 (88) |
| Олигоартрит | 11 (12) |
| Дактилит | 27 (28) |
| Сакроилеит | 37 (39) |
| Спондилит | 46 (48) |
| Внутрисуставной остеолиз | 11 (11,5) |
| Акральный остеолиз | 2 (2) |
| Активность 1 степени | 36 (38) |
| Активность II степени | 38 (40) |
| Активность III степени | 21 (22) |
| Рентгенологическая II стадия | 59 (62) |
| Рентгенологическая III стадия | 25 (26) |
| Рентгенологическая IV стадия | 11 (12) |
| Функциональная недостаточность I степени | 65 (69) |
| Функциональная недостаточность II степени | 25 (26) |
| Функциональная недостаточность III степени | 5 (5) |
| Терапия НПВП | 95 (100) |
| Базисная терапия метотрексатом (7,5-15 мг/нед еженедельно) | 42 (44) |
В табл. 3 и 4: НПВП – нестероидные противовоспалительные препараты.
Характеристика пациентов с РеА представлена в табл. 3.
Таблица 3
Характеристика пациентов с РеА
| Показатель | Все пациенты с РеА,n (%) |
| Количество пациентов | 120 (100) |
| Полиартрит | 34 (28) |
| Олигоартрит | 45 (37,5) |
| Сакроилеит | 39 (32,5) |
| Спондилит | 22 (18,3) |
| Ахиллобурсит | 73 (60,8) |
| Энтезопатии | 86 (71,6) |
| Активность I степени | 49 (40,8) |
| Активность II степени | 32 (26,6) |
| Активность III степени | 39 (32,6) |
| Рентгенологическая I стадия | 50 (41,6) |
| Рентгенологическая II стадия | 66 (55,9) |
| Рентгенологическая III стадия | 3 (2,5) |
| Функциональная недостаточность I степени | 117 (97,5) |
| Функциональная недостаточность II степени | 3 (2,5) |
| Конъюнктивит | 11 (9) |
| Увеит | 2(1,7) |
| Иридоциклит | 3 (2,5) |
| Лихорадка | 10 (8,3) |
| Изолированная хламидийная урогенитальная инфекция | 98 (82) |
| Хламидийная инфекция и трихомониаз | 12 (10) |
| Хламидийная, уреаплазменная инфекция и трихомониаз | 10 (8) |
| Терапия НПВП | 120 (100) |
Характеристика пациентов с АС представлена в табл.4.
Таблица 4
Характеристика пациентов с АС
| Показатель | Все пациенты с АС, n (%) |
| Количество пациентов | 51 (100) |
| Центральная форма | 36 (71) |
| Ризомелическая форма | 7 (14) |
| Периферическая форма | 8 (15) |
| СакроилеитI стадия | 4 (7,8) |
| Сакроилеит II стадия | 12 (23,5) |
| Сакроилеит III стадия | 14 (27,5) |
| Сакроилеит IV стадия | 18 (35,3) |
| Спондилит I стадия | 4 (7,8) |
| Спондилит II стадия | 10 (19,6) |
| Спондилит III стадия | 19 (37,3) |
| Спондилит IV стадия | 18 (35,3) |
| Энтезопатии | 43 (84) |
| Активность I степени | 10 (19,6) |
| Активность II степени | 24 (47) |
| Активность III степени | 17 (33,4) |
| Рентгенологическая I стадия | 4 (7,8) |
| Рентгенологическая II стадия | 10 (19,6) |
| Рентгенологическая III стадия | 19 (37,3) |
| Рентгенологическая IV стадия | 18 (35,3) |
| Функциональная недостаточность I степени | 14 (27,5) |
| Функциональная недостаточность II степени | 34 (66,7) |
| Функциональная недостаточность III степени | 3 (5,8) |
| Терапия НПВП | 51 (100) |
| Базисная терапия сульфасалазином (2,0 г/сут ежедневно) | 15 (29) |
В качестве материала для исследований использовали сыворотки крови и поликлональные IgG, выделенные из сыворотки крови пациентов со и здоровых лиц. Выделение препаратов по-ликлональных IgG 1; 2 и 4 подкласса из сыворотки крови проводили комбинированным риванол-аффиннохроматографическим методом [1, 2]. Контроль чистоты полученных IgG проводили с помощью электрофореза в полиакриаламидном геле в диссоциирующих и восстанавливающих условиях [5].
Постановка реакций ДНКазной активности осуществлялась согласно методикам, разработанным нами и апробированным на различных биологических моделях [З, 4]. Оценивалась ДНКазная активность IgG на 1 мг образца (удельная ДНКазная активность IgG). Учет реакции проводили визуально в баллах. Отсутствие активности – компактный сгусток ДНК – 0 баллов; 1 балл – минимальная активность – рыхлый сгусток; 2 балла – слабая активность – рыхлый сгусток, хлопья, нити; З – умеренная активность – хлопья, нити; 4 – высокая активность — распад сгустка, хлопья, нити; 5 баллов — максимальная активность — полный распад сгустка ДНК с образованием гомогенной взвеси. Статистический анализ результатов исследования выполняли с использованием аналитического пакета Statistica 7.0. Для оценки диагностической точности разработанных лабораторных тестов проводили расчет операционных характеристик [4].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Уровни удельной ДНКазной активности Ідй у обследованных лиц представлены в табл. 5.
Таблица 5
Уровни удельной ДНКазной активности ідв у обследованных лиц
| Группа | Уровни удельной ДНКазной активности IgG | ||||
| Медиана | Размах (min-max) | 95% ДИ для медианы | 25-75-я перцен-тиль | Наблюдений, n | |
| СпА | 2,50 | 0,00-5,00 | 2,50-3,00 | 1,5-3,50 | 266 |
| ПА | 3,50 | 1,00-5,00 | 3,29-3,71 | 3,00-4,00 | 95 |
| РеА | 2,50 | 0,00-5,00 | 2,00-2,56 | 1,50-3,00 | 120 |
| АС | 1,50 | 0,00-4,00 | 1,0-1,50 | 1,00-2,00 | 51 |
| Здоровые лица | 0,00 | 0,00-2,50 | 0,00-0,50 | 0,00-0,50 | 69 |
Различия между уровнями удельной ДНКазной активности IgG у пациентов со СпА, а также у пациентов с РеА, ПА и АС по сравнению с контрольными величинами в группе здоровых лиц оказались статистически высокозначимыми (p<0,0001). Выявлены статистически высокозначимые различия между уровнями удельной ДНКазной активности IgG у пациентов с ПА и РеА, ПА и АС, а также РеА и АС (p<0,0001).
Частота выявляемости положительных результатов при определении удельной ДНКазной активности Ідй (31 балла) у обследованных лиц представлена в табл. 6.
Таблица 6
Частота выявляемости положительных результатов определения удельной ДНКазной активности ДО у обследованных лиц
| Группа | Частота резул Д | выявляемости положительных ьтатов определения удельной НКазной активности IgG | |
| % | 95% ДИ | Наблюдений, n | |
| СпА | 93,61 | 90,67-96,55 | 266 |
| ПА | 100,00 | 100,00-100,00 | 95 |
| РеА | 95,00 | 91,10-98,90 | 120 |
| АС | 78,43 | 67,14-89,72 | 51 |
| Здоровые лица | 23,19 | 13,23-33,15 | 69 |
Определены статистически высокозначимые различия между частотами выявляемости положительных результатов определения удельной ДНКазной активности IgG у пациентов со СпА и у здоровых лиц, а также у пациентов с ПА, РеА и АС и в контрольной группе (p
При выполнении ЯОО-анализа теста дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности Ідй установлено, что максимальные показатели чувствительности и специфичности наблюдаются при уровне удельной ДНКазной активности (cut-off), равном 2,5 балла.
ROC-кривая для теста дифференциальной диагностики ПA и по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности IgG представлена на рис. 1.
Показатели ЯОО-анализа теста дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности !дй представлены в табл. 7.
Таблица 7
Показатели ROC-анализа для теста дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности IgG
| Показатель РОС-анализа | Значение |
| Площадь под ROC-кривой (AUC) | 0,82 |
| Стандартная ошибка | 0,09 |
| 95% ДИ | 0,77-0,83 |
| Уровень значимости (р) | 0,0001 |
Результаты расчета основных показателей теста для дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определения уровней удельной ДНКазной активности Ідй представлены в табл. 8.
Таблица 8
Результаты расчета основных показателей теста для дифференциальной диагностики ПА и СпА по результатам определе-
ния уровней удельной ДНКазной активности IgG
| Характеристики теста | ПА и СпА (АС+РеА) |
| Диагностическая чувствительность | 78,95%(95% ДИ: 69,40-86,60) |
| Диагностическая специфичность | 69,59% (95% ДИ: 62,10-76,40) |
| Прогностическая ценность положительная (прогностическая ценность положительного результата теста), % | 59,10 |
| Прогностическая ценность отрицательная (прогностическая ценность отрицательного результата теста), % | 85,60 |
| Индекс точности (диагностическая эффективность), % | 67,67 |
| Отношение правдоподобия положительного результата теста (ОП+) | 2,60 |
| Отношение правдоподобия отрицательного результата теста (ОП-) | 0,30 |
При изучении взаимосвязи между уровнями удельной ДНКазной активности Ідй и клиническими, лабораторными и инструментальными данными, лечебными мероприятиями у обследованных лиц получены результаты, представленные в табл. 9 (указаны коэффициенты корреляции при уровне значимости р
Таблица 9
Результаты анализа взаимосвязи между уровнями удельной ДНКазной активности IgG и клиническими, лабораторными и инструментальными данными, лечебными мероприятиями
| Коррелирующие признаки | Коэффициент корреляции, r |
| СпА | |
| Уровень удельной ДНКазной активности IgG и пролиферативные явления в суставах | 0,35 |
| Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие скованности в суставах кистей | 0,36 |
| Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие кожного псориаза | 0,50 |
| Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие артрита | 0,48 |
| Уровень удельной ДНКазной активности IgG и наличие полиартрита | 0,38 |
| ПА | |
| Уровень удельной ДНКазной активности IgG и экссудативные явления в суставах | 0,35 |
Leave a comment